核心期刊咨詢網
您當前的位置:首頁 > 學術論文 > 農業論文 > 30種滇西植物β-羥高鐵血紅素形成抑制活性

30種滇西植物β-羥高鐵血紅素形成抑制活性

來源:核心期刊咨詢網位置:農業論文時間:2019-11-07 10:1812

  摘 要: 瘧疾是嚴重危害人類健康的寄生蟲病之一,據世界衛生組織報道每年有數十萬人因瘧疾而死亡,我國瘧疾防治工作雖然取得了長足發展,但在中國云南邊境地區和中國西藏林芝地區本地瘧疾病例依然存在,再加上西藏自治區和云南省地理位置特殊,與周邊瘧疾高發的國家接壤,邊民來往十分頻繁,傳染源輸入無法杜絕。

  為了發現植物來源的新型抗瘧疾天然產物,該研究依次用75%乙醇和蒸餾水對30種滇西植物進行回流提取,并采用β-羥高鐵血紅素形成抑制實驗對這些樣品進行抗瘧活性篩選。結果表明:在供試的30種植物中,玉葉金花、回心草以及云南甘草等19種植物粗提物具有不同程度的β-羥高鐵血紅素形成抑制活性,具有抗瘧活性的植物種類涉及17個科、19個屬。其中,蝦子花、東方紫金牛、姜花水提物以及反瓣老鸛草地下部分醇提物的活性較好,其IC50值分別為796.0、951.0、1 033.0、1 388.9 μg·mL-1,值得進一步深入研究。蝦子花、東方紫金牛的HPLC分析結果顯示,其活性成分應為酚性成分。

  關鍵詞: 滇西, 植物, 抗瘧活性, β-羥高鐵血紅素形成抑制實驗, HPLC

植物遺傳資源學報

  《植物遺傳資源學報》(季刊)創刊于1982年,前身是中國農業科學院作物品種資源研究所和中國農學會遺傳資源分會主辦的《作物品種資源》。

  瘧疾是一種由瘧原蟲引起的嚴重危害人類健康的疾病之一。據世界衛生組織(WHO)統計,全世界91個瘧疾流行國家和地區2016年共有2.16億瘧疾病例,因瘧疾死亡人數達44.5萬。其中,90%的瘧疾病例和91%的死亡病例發生在撒哈拉以南的非洲地區,7%的瘧疾病例和6%的死亡病例發生在東南亞地區(World Health Organization, 2017a)。另外,2014年全球瘧疾病例為2.1億例,2015年為2.11億例,2016年為2.16億例,明顯呈現逐年上升的趨勢(World Health Organization, 2017a)。

  在我國,經過幾代人的努力,從建國初期瘧疾發病人數高達3 000萬例到2016年的3 321例來看,我國瘧疾防治工作取得了顯著成效(張麗等, 2017)。雖然我國瘧疾防治工作取得了長足發展,并且2016年99.9%的瘧疾病例為境外輸入性病例,但在云南邊境地區和西藏林芝地區本地瘧疾病例依然存在(張麗等, 2017)。加上中國的西藏自治區和云南省地理位置特殊,與印度、尼泊爾、緬甸和越南等周邊瘧疾高發的南亞、東南亞國家接壤,邊民來往十分頻繁,傳染源輸入無法杜絕。因此,我國瘧疾防控形勢依然不容樂觀。

  目前,臨床用于治療瘧疾的藥物主要為奎寧和青蒿素兩類(World Health Organization, 2010, 2015)。由于長期使用氯喹和青蒿素,其瘧原蟲抗藥株已逐步顯現(Imwong et al., 2017; Price et al., 2014; World Health Organization, 2017b)。因此,研發新一代抗瘧藥物對瘧原蟲病防治工作意義重大。研究發現,游離血紅素對瘧原蟲有毒性,瘧原蟲通過將血紅素轉換成瘧原蟲色素(β-羥高鐵血紅素)的方式解毒(Orjih et al., 1981; Pagola et al., 2000; Slater et al., 1991)。與此同時,奎寧等紅內期抗瘧藥可與血紅素絡合從而抑制β-羥高鐵血紅素形成,成為紅內期抗瘧藥物的作用靶點之一(Chong & Sullivan Jr, 2003)。因此,本研究采用β-羥高鐵血紅素形成抑制實驗對30種滇西植物進行抗瘧活性篩選,并對活性較好的植物樣品進行初步的HPLC分析,以期能發現若干種活性較強的植物,為尋找和開發繼奎寧、青蒿素之后的第三代植物來源的新型抗瘧天然產物奠定基礎。

  1 材料與方法

  1.1 試劑和儀器

  試劑:氯高鐵血紅素、氯喹二磷酸鹽、HEPES均購于美國Sigma公司;吡啶、冰醋酸均購于上海申博化工有限公司;乙酸鈉購于國藥集團化學試劑有限公司;二甲基亞砜購于天津化學試劑有限公司;色譜甲醇購于Fisher Chemical公司;HPLC用水為市售娃哈哈礦泉水。

  儀器:BioTek Synergy HT多功能酶標儀為美國BioTek儀器公司生產;MCO-18AIC CO2培養箱為日本三洋公司生產;AL204電子天平為梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產;EYELA FDU-2100冷凍干燥機為日本東京理化器械株式會社生產;RE-5205旋轉蒸發器為上海亞榮生化儀器廠生產;Agilent 1260高效液相色譜儀為美國安捷倫科技有限公司生產。

  1.2 植物樣品

  30種植物樣品(表1)均于2013年采自滇西地區,由大理大學藥學與化學學院生藥教研室張德全博士鑒定,植物標本均存放于大理大學藥學與化學學院姜北教授研究組。

  1.3 植物提取物的制備

  取約50 g干燥的植物樣品粉碎,依次用75%乙醇、蒸餾水熱回流提取。處理過程:(1)用75%乙醇回流提取3次(每次250 mL),將3次提取的溶液合并后在50 ℃下用旋轉蒸發器除去大部分溶劑,之后轉移至冷凍干燥機上充分干燥。(2)經75%乙醇提取過的植物殘渣繼續用蒸餾水回流提取3次,合并提取液蒸餾近干,之后轉移至冷凍干燥機上充分干燥。(3)精密稱取上述植物提取物浸膏干粉5.0 mg,以1 mL蒸餾水溶解得相應溶液,之后用水按比例(1∶4)稀釋成系列濃度溶液備用。植物提取率以凍干粉重量除以提取植物樣品干重后乘以100%計算。

  1.4 β-羥高鐵血紅素形成抑制實驗

  參照肖朝江等(2014)對30種滇西植物進行β-羥高鐵血紅素形成抑制活性測試的方法。將50 μL不同濃度的供試樣品和50 μL氯高鐵血紅素儲備液(1.0 mmol·mL-1,溶解于DMSO中)混合于96孔板中,一式3份;同時,設置蒸餾水陰性對照和氯喹二磷酸鹽陽性對照。之后每孔加入80 μL的醋酸鹽緩沖液(4 mol·mL-1,pH 5.0),置于50 ℃培養箱中孵育5 h;取出待室溫后,每孔加入100 μL 30%(v/v)的吡啶-HEPES溶液(20 mmol·mL-1,pH 7.5)使微孔板中固體混懸;室溫放置待未反應的羥高鐵血紅素溶解完全后,從每孔中精密移取50 μL上清液至另一96孔板中,之后均以200 μL上述吡啶-HEPES溶液稀釋,并于405 nm波長處測定吸光值。由羥高鐵血紅素標準曲線得出未反應的羥高鐵血紅素的濃度,從而計算出供試品對β-羥高鐵血紅素形成的抑制濃度(以IC50表示)。

  1.5 HPLC分析方法

  色譜柱為phenomenex C18 (250 mm×4.60 mm, 5 μm),檢測波長220 nm,體積流量1 mL·min-1,進樣量20 μL,柱溫30 ℃。蝦子花提取物洗脫程序:水(A)-甲醇(B):0~40 min,0%~35% B;40~50 min,35%~70% B;50~60 min,70%~100% B;60~70 min,100% B。東方紫金牛提取物洗脫程序:水(A)-甲醇(B):0~30 min,0%~25% B;30~40 min,25%~50% B;40~50 min,50%~60% B;50~60 min,60%~100% B。

  2 結果與分析

  熱回流提取實驗(表1)表明,30種滇西產植物75%乙醇的平均提取率為21.7%,最高為39.0%(高河菜);水的平均提取率為5.1%,最高為9.2%(拔毒散)。

  抗瘧活性篩選結果(表2)表明,30種滇西植物中蝦子花、東方紫金牛、姜花、反瓣老鸛草、拔毒散、高河菜、滇黃芩、土香薷、曲苞芋、接骨木、云南貫眾、四翅月見草、西南委陵菜、玉葉金花、木芙蓉、回心草、瑞香狼毒、小苞黃芪和云南甘草19種植物具有不同程度的β-羥高鐵血紅素形成抑制活性。其中,蝦子花、東方紫金牛、姜花水提物以及反瓣老鸛草地下部分醇提物的活性較好,其IC50值分別為796.0、951.0、1 033.0、1 388.9 μg·mL-1。此外,本實驗篩選出來的活性植物涉及千屈菜科、紫金牛科、牻牛兒苗科等17個科,蝦子花屬、老鸛草屬等19個屬。

  運用SPSS統計軟件(版本19.0)進行兩獨立樣本均數比較的t檢驗,玉葉金花和回心草水提物以及云南甘草醇提物與陽性對照氯喹二磷酸鹽對β-羥高鐵血紅素形成抑制活性差異具有統計學意義(P < 0.01)。

農業論文發表流程

農業論文發表流程-核心期刊咨詢網
城市管理論文發表咨詢電話:400-6800-558

相關論文閱讀

期刊論文問答區

農業優質期刊

省級期刊、國家級期刊、核心級期刊快速發表,農業論文發表就找核心期刊咨詢網

最新期刊更新

精品推薦